2025-8-14
【新品发布】pfAgo限制性内切酶
PfAgo可被设计为 高特异性核酸检测工具，在恒温条件下切割靶标DNA/RNA，结合等温扩增（如LAMP、RPA）提高灵敏度。例如HPV病毒检测或SNP分型与突变检测。
【新品发布】pfAgo限制性内切酶
pfAgo（Pyrococcus furiosus Argonaute）是一种来源于超嗜热古菌Pyrococcus furiosus的Argonaute蛋白，具有DNA/RNA引导的核酸内切酶活性。与传统限制性内切酶不同，pfAgo不依赖特定识别序列，而是通过短链引导DNA（gDNA）靶向切割互补的DNA或RNA，因此在基因编辑、核酸检测和分子诊断中具有独特优势。它利用5'-磷酸化的单链DNA引导序列（gDNA）来识别并切割互补的DNA靶序列。gDNA一般为16 -18 nt长度的5’-磷酸化修饰的单链DNA。酶切位点位于与引导序列互补的5’端开始的第10和11个核苷酸之间。
一、易致PfAgo的特点
1. 高温活性（最佳温度约为95°C）（适用于野外/POCT检测）
2. 无需PAM序列（区别于CRISPR系统）
3. 通过DNA引导精准识别靶标
4. 可切割双链或单链DNA
5. 适用于多重检测、分子诊断等场景
二、应用示例
PfAgo可被设计为 高特异性核酸检测工具，在恒温条件下切割靶标DNA/RNA，结合等温扩增（如LAMP、RPA）提高灵敏度。例如HPV病毒检测或SNP分型与突变检测。
三、检测步骤
1. 目标序列特异性扩增。可采用RPA，LAMP或PCR扩增。
2. 反应体系：
组份名称 | 体积 | 终浓度 | |
1 | PfAgo Reaction Buffer (10X) | 2μL | 1X |
2 | MnCl2 (40mM) | 1μL | 2mM |
3 | gDNA (10μM) | 4μL | 2μM |
4 | PfAgo (1μM) | 4μL | 200nM |
5 | Reporter (10μM) | 1μL | 500nM |
6 | 扩增产物* | XμL | - |
7 | H2O | 补齐到20 μL | |
3. 设置反应温度95°C， 每分钟读取一次荧光数值， 时间30-40分钟。
四、荧光结果示例
