2025-8-14
高产量“CRISPR guide RNA转录试剂盒”，手把手教你得到心仪“CRISPR gRNA”
易致生物研发的“CRISPR guide RNA(gRNA)转录试剂盒”内含T7 RNA Polymerase Mix，可以从少量样本得到高效转录，合成gRNA（适用于Cas12a、Cas13a、Cas12b和Cas9等的gRNA制备）
高产量“CRISPR guide RNA转录试剂盒”，手把手教你得到心仪“CRISPR gRNA”
易致生物研发的“CRISPR guide RNA(gRNA)转录试剂盒”内含T7 RNA Polymerase Mix，可以从少量样本得到高效转录，合成gRNA（适用于Cas12a、Cas13a、Cas12b和Cas9等的gRNA制备）；0.5μg对照模板单次反应可获得产量高达百微克左右的gRNA。该试剂盒不仅大大减少了sgRNA筛选的成本，而且可以在实验室情况下，高效快速得到大量的gRNA，减少了合成需要的时间。
一、高效率T7 RNA聚合酶
易致生物研发的T7 RNA聚合酶来自重组E.coli BL21菌株发酵表达纯化，无内源核酸残留、无内外切酶残留污染，不仅转录效率极高，而且可合成多种类型的RNA，如：mRNA疫苗制备、单链RNA转录合成、制备放射标记的RNA探针、合成用于体外转录和微量注射的mRNA、合成用于结构及功能研究的RNA、非同位素标记的RNA、合成基因表达实验的反义RNA、合成基因靶向功能的gRNA等；线性质粒、PCR产物均可用作体外合成RNA的模板。
二、高质量gRNA制备流程
1. 模板准备（以下方式仅供参考，实际操作根据实验室条件灵活选择。）
（1）合成的DNA模板
人工合成DNA单链或双链片段(包含T7启动子序列和转录片段)也可以作为体外转录模板。
（2）质粒模板
将上述片段插入载体骨架中，即可得到质粒模板，使用限制性内切酶将质粒DNA要转录的片段之后的下游位点酶切使其线性化，建议纯化线性片段。
（3）PCR产物模板
可以直接使用PCR扩增后反应产物(包含T7启动子序列和转录片段，例模板准备第1条)做RNA转录模板。建议进行纯化后再进行下一步实验，可提高转录效率。
2. 操作步骤：
具体操作步骤见易致生物“CRISPR guide RNA转录试剂盒”（Lot：SG-RNA-001）
以BrCas12b模板示例：
三、性能展示
1.转录性能
2. 转录后gRNA性能
转录后gRNA经易致生物LAMP-CRISPR一步法试剂盒（Lot：LAM-CAS-01）验证，功能活性正常。
