2026-10-22

牧场现场,扩增 15 分钟检出牛多杀性巴氏杆菌|EZassay RPA 试剂盒获 SCI 收录

青岛农业大学团队以 kmt1 为靶标,建立牛多杀性巴氏杆菌 RPA-CRISPR/Cas12a 侧流试纸条检测法。37 °C 扩增约 15 分钟,检出限 10 copies/µL,40 份临床样本与常规 PCR 一致。方法学写明扩增环节使用 EZassay 商业化 RPA 试剂盒。

牧场现场,扩增 15 分钟检出牛多杀性巴氏杆菌——论文解读封面图

牛呼吸道疾病(BRD)是养牛业的老问题,其中多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)的快速确诊,长期落在实验室和 PCR 设备上。对没有实验条件的牧场、资源受限的检疫现场来说,这一步往往只能等。

一项来自青岛农业大学动物医学院的研究,给出了一条可现场执行的路径:以该菌种特异性 kmt1 基因为靶标,建立 RPA-CRISPR/Cas12a 结合侧流试纸条(LFS)的检测方法。RPA 扩增在 37 °C 下约 15 分钟完成,Cas12a 的切割信号在试纸条上直接目视判读,整个流程不依赖热循环仪或荧光读卡设备。

研究报道,该体系检出限达 10 copies/µL,与 10 种常见牛病原无交叉反应;在 40 份临床牛样本中,结果与常规 PCR 一致(17 例阳性、23 例阴性),重复性稳定。需要说明的是,上述数据来自该研究完整的检测体系,而非其中单一的试剂组件。

检测路径:kmt1 靶标 → RPA 扩增(37 °C,约 15 分钟)→ Cas12a → 侧流试纸条;10 copies/µL、10 种牛病原无交叉反应、40 份临床样本与常规 PCR 一致

EZassay 试剂盒在这套体系里的角色

扩增与读出可以一并配齐

从 RPA 试剂盒到与试纸条配套的读出方案,同一体系内取用,不必多方采购拼接。

体系内含 UDG 防污染设计

作者在方法学中写明,体系整合了 UDG 系统,用于降低气溶胶携带污染风险。

按厂商标准 protocol 执行

反应体系与条件公开,结果可复现。

在这套体系里,RPA 扩增环节选用的是 EZassay 的商业化 RPA 试剂盒,按厂商标准流程执行。作者在方法部分写明,体系整合了 UDG 防污染系统,以降低气溶胶携带污染风险。原文为:

The RPA reaction was performed in a 20 µL reaction system using a commercial RPA kit (Shenzhen EZassay Biotechnology Co., Ltd., China) according to the manufacturer's protocol, with the integration of Uracil-DNA Glycosylase (UDG) system to prevent aerosol carry-over contamination. — Han X, et al. Rapid on-site detection of Pasteurella multocida in cattle using an LFS-based RPA-CRISPR/Cas12a assay. Irish Veterinary Journal. 2026. DOI: 10.1186/s13620-026-00360-4 · PMID 42806371

来自这套检测体系的三条可复用判断

  • 1.等温扩增 + CRISPR 的现场检测路线,在兽医领域已经有可复现的公开案例
  • 2.挑试剂盒时,除了扩增效率,防污染设计(如 UDG)值得一并考虑
  • 3.免仪器的目视判读,是资源受限场景下可行的读出方式

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